Evaluación de diferentes crioprotectores para la crioconservación de espermatozoides de yamú (Brycon amazonicus)

Pablo Cruz Casallas, Víctor Medina Robles, Yohana Velasco Santamaría

Abstract


Resumen

El uso de dimetilsulfoxido (DMSO), etilenglicol (ETG), propilenglicol (PPG) y metanol (MET) para la crioconservaciÛn de semen de yamú (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz 1829) fue evaluado con el objetivo de determinar la calidad post-descongelación y la fertilidad in vitro del semen. Para este propósito, machos y hembras, sexualmente maduros fueron inducidos a la maduración final de las gónadas por medio de extracto de hipófisis de carpa. El semen obtenido fue evaluado y diluido (1:4) en una solución a base de yema de huevo (12%) y glucosa (5.5%). Se utilizó cada crioprotector a concentraciones de: 3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 y 15% para un total de 24 tratamientos. El semen diluido fue empacado en pajillas de 0.5 mL para ser congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) a -194 ºC durante 30 min y luego transferidas y almacenadas hasta por 10 días en un termo de NL para su evaluación. Para las pruebas de fertilidad, las pajillas (n = 6) de cada uno de los tratamientos fueron descongeladas a 35 ºC por 60 seg y posteriormente evaluadas. Se encontró que los tratamientos DMSO-5%, ETG-3.75%, PPG-3.75% y MET-3.75% presentaron los mayores porcentajes de movilidad (PM) y tiempos de activación (TA), siendo DMSO-5% el más alto (PM 76 ± 2.4; TA 88.2 ± 6.1). De otro lado, los tratamientos PPG-3.75% y MET-3.75% mostraron los mayores porcentajes de fertilidad (50 ± 1.4 y 47.8 ± 1.4, respectivamente), pero fueron inferiores (p < 0.05) cuando se compararon con el semen fresco (64.7 ± 1.7). En general se observó que a medida que aumentó la concentración del crioprotector, la calidad seminal postdescongelación disminuyó, sin observarse relación directa entre la movilidad espermática y la fertilidad.

Palabras clave: calidad seminal, crioprotector, espermatozoide, fertilización.

Summary

The effect of dimethyl sulphoxide (DMSO), ethylene glycol (ETG), propylene glycol (PPG) and methanol (MET) in yamu (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz, 1829) semen cryopreservation was evaluated with the aim of determining the post-thawing quality and in vitro fertility. For this purpose, sexually mature yam˙ females and males were induced to promote ovulation and spermation with carp pituitary extract. The semen obtained was evaluated and diluted 1:4 in a solution with 12% egg yolk and 5.5% glucose. Different concentrations (3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 and 15%) for each one of the 4 cryoprotectants were used for a total of 24 treatments. The diluted semen was frozen into 0.5 mL straws by liquid nitrogen vapours (LN) during 30 minutes and then transferred to a container with LN until be assayed. The straws (n = 6) corresponding to each treatment were thawed at 35 ºC for 60 seconds and evaluated to select the best concentration for each cryoprotector for the fertility test. 5% DMSO, 3.75% ETG, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments presented the highest motility percentages (MP) and activation time (AT) being  5% DMSO the best (MP 76 ± 2.4; AT 88.2 ± 6.1). On the other hand, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments showed the highest fertility percentages (50 ± 1.4 and 47.8 ± 1.4, respectively); however, these percentages were significantly lower (p < 0.05) than these obtained with fresh semen (64.7 ± 1.7). In general, it was observed that the increase in the cryoprotector concentration decreased semen quality post-thawing, and there was not direct relationship between sperm motility and fertility.

Key words:  cryoprotectant, fertilization, seminal quality, spermatozoa.


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