Identificación electroforética de α2-macroglobulina en plasma de ovino de pelo (Ovis aries) y búfalo (Bubalus bubalis)

Daniel I. Barrera, Jorge H. Giraldo, Carlos M. Duque, Luis F. Arbeláez

Abstract


Resumen

A través del presente estudio se analizaron plasmas sanguíneos de seis especies, incluyendo el humano tanto en estado gestante como no gestante, identificándose por primera vez en plasma, la glicoproteína α2-Macroglobulina (α2-M) de ovino de pelo (Ovis aries) y de búfalo (Bubalus bubalis). La presencia de esta proteína en el plasma sanguíneo de todas las especies en estudio se demostró mediante electroforesis en gel de poliacrilamida usando sodio dodecilsulfato como agente denaturante (SDS PAGE) al 7.5% identificándose como bandas de 180 kDa y en forma no denaturante PAGE 5% como bandas de 720 kDa. Estas últimas bandas fueron claramente intercambiables de la forma tetramérica a la forma monomérica en los ensayos electroforéticos. Como controles se usaron la α2-M (tetramérica) y la proteína de la zona de gestación (PZP) (dimérica) purificadas a un 98%; así como, las bandas de estas dos proteínas en el plasma humano. El análisis de la secuencia del dominio N-terminal de la (α2-M) de ovino de pelo, fue muy similar al de la proteína humana purificada. Tanto la α2-M humana como la bovina llegaron a ser activadas a la forma rápida por medio de la reacción con metilamina. Lo anterior demuestra diferencias en la reactividad de las α2-M animales con la amina primaria cuando se comparan los resultados con la forma rápida de la α2-M humana. Será necesario unificar los métodos de purificación de esta proteína en todas las especies, de tal manera que los dominios sensibles de las α-macroglobulinas (tioéster y región señuelo) tengan el mismo tratamiento y el mismo grado de desnaturalización para todas las preparaciones de α2-M.

Palabras clave: α2-macroglobulina, Bubalus bubalis, Ovis aries, SDS PAGE.

Summary

Blood plasma from six different non pregnant and pregnant species, including human blood plasma, was analyzed for detection of α2-Macroglobulin (α2-M). The tropical hair sheep (Ovis aries) and the buffalo (Bubalus bubalis) were studied for the first time in Colombia. The presence of the α2-M in plasma of all the species was demonstrated by SDS 7.5% PAGE as bands of 180 kDa as well as by non-denaturing 5% PAGE with bands of 720 kDa. The tetrameric form α2-M (tetramérica) and the pregnancy zone protein (PZP) (dimeric) purified at 98%, as well as its corresponding bans from human plasma were used as control. The N-terminal sequence of the band of 180 kDa in Tropical hair sheep plasma was very similar to the purified human α2-M. The results indicated the presence of α2-M in blood plasma of all the species tested, while the PZP was present only in the pregnant human plasma. Both human and bovine α2-M became activated with the fast form by reacting with Methylamine. This Fac. demonstrates the differences in the reactivity of the animal's α2-M with primary amine as compared with the human α2-M. It could be necessary to unify purification methods into one method for all species, so that the sensitive domain of the α-macroglobulins (thiolester and bait region) receives the same treatment and grade of denaturation for all α2-M preparation.

Key Words: α2-macroglobulin, Bubalus bubalis, Ovis aries, SDS PAGE.


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